괭생이모자반 추출물의 기능성 원료 표준화를 위한 Fucose 분석법 개발 및 검증

Abstract

본 연구는 괭생이모자반의 기능성 원료로 개발하고자 원료 표준화를 위해 지표물질을 선정하여 분석법 개발 및 검증을 실시하였다. 괭생이모자반 추출물의 지표성분을 fucose로 설정하고 이에 대한 HPLC 분석법을 확립하여 유효성 검증을 실시하였다. 분석법 유효성 검증은 특이성, 직선성, 정확도, 정밀도(반복성 및 재현성)를 확인하였다. 그 결과 표준용액과 괭생이모자반 추출물 간의 HPLC 크로마토그램의 UV spectrum의 일치 여부를 확인하였고 다른 물질과 간섭 없이 피크가 분리된 것을 확인하였다. 또한 표준용액 검량선의 결정계수(R2)는 3회 분석 모두 0.998 이상으로 확인되어 적합하였다. 정확도는 시료 약 25 mg을 취한 후, 시료 중에 함유된 지표(기능)성분의 함량이 50%, 100%, 200%의 농도가 되도록 표준용액(237.9 μg/mL)을 0.25 mL, 0.5 mL, 1 mL씩 첨가하여 회수율을 확인한 결과 94.0~95.6%로 나타나 정확도가 있는 것으로 확인되었다. 정밀도 확인에서도 시료량의 50%, 100%, 200%에 해당하는 양을 정량하여 5회 이상 반복 측정한 결과 상대표준편차(%RSD)는 0.94%로 나타났고, 시료량을 정량하여 시험자, 기기, 일자를 달리하여 5회 이상 반복 측정하여 상대표준편차를 구한 결과 상대표준편차(%RSD)는 0.47%로 나타나 재현성이 확인되었다. 이와 같은 분석 결과를 통해 확립된 괭생이모자반의 지표물질인 fucose의 HPLC 분석법은 적합한 시험법인 것으로 검증되었으며 본 시험법은 향후 괭생이모자반의 기능성 원료 개발과 표준화를 위한 자료 및 품질관리를 위한 자료로 활용될 수 있을 것으로 보인다.

This study developed and validated a high-performance liquid chromatography (HPLC) analysis method for the quantification of fucose in Sargassum horneri extracts. HPLC was performed using a YMC-Pack ODS-AQ column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) with a flow rate of 1.0 mL/min at 40°C, and detection was conducted at a wavelength of 250 nm. The validation of the method was assessed by evaluating specificity, accuracy, precision, limit of detection, limit of quantitation, and linearity. With respect to specificity, the retention time of the fucose standard solution matched that of the fucose in the Sargassum horneri extract. The linearity exhibited a correlation coefficient (R2) above 0.998. The accuracy assessment revealed a recovery rate ranging from 94.0±2.5% to 95.6±0.4% for different concentrations. The overall relative standard deviation (%RSD) for precision was 0.94%, indicating good repeatability, and the mean value over three days of analysis was 9.69±0.05 mg/g with a %RSD of 0.47%, demonstrating reproducibility. The limits of detection and quantitation were determined as 2.04 μg/mL and 6.19 μg/mL, respectively. Based on these results, the developed HPLC analysis method for fucose in Sargassum horneri extract could be considered reliable and reproducible.