Rhinovirus 감염에 의한 기관지 상피세포에서 RANTES 발현과 전사인자 NF-Kb의 작용기전

Abstract

배경: Rhinovirus(RV)는 상기도 감염을 일으키는 주요 바이러스로 천식과 만성폐쇄성폐질환의 악화와 연관있는 것으로 알려져 있다. RV 감염은 기존의 특정 항원에 감작되어진 사람들에 있어 조직 내 호산구의 침윤을 야기할 수 있다. RANTES는 잘 알려진 호산구에 대한 강력한 화학주성인자로 본 연구에서는 RV 감염이 RANTES 발현에 미치는 영향에 대해서 알아보고자 한다. 목적: Rhinovirus가 RANTES 발현에 미치는 영향과 이를 조절하는 전사인자로서의 NF-Kb의 역할에 대해 규명한다. 대상 및 방법: Rhinovirus 14를 A549 세포에 감염시킨 후 RANTES와 mRNA를 ELISA와 RT-PCR을 통하여 측정하였다. RANTES 발현에 작용하는 전사인자 NF-Kb의 역할을 확인하기 위하여 competition assay 및 supershift를 포함한 gel shift assay를 시행하였다. RANTES promotor를 이용하여 RANTES 발현에 중요한 염기서열 부위를 확인하였다. 이를 위하여 일부 염기서열에 임의의 돌연변이를 만들었다. NF-KB에 대한 억제제로서 IKB 및 항산화제를 이용하여 RANTES의 발현변화를 확인하였다. 결과: RANTES와 mRNA는 RV 감염 후 증가하여 약 12시간이 지난 후 최고치에 달하였다. RV 감염은 NF-KB-DNA binding activity를 증가시켰다. 특히 p65 NF-KB subunit이 중요하였다. RANTES promoter에 대한 cis element analysis에서 염기서열 -50~-40 사이가 RANTES 발현에 중요한 역할을 하였다. NF-KB작용을 막는 IKB, 항산화제, 그리고 NF-KB 억제제(TLCK, TPCK)를 사용하였을 때 RANTES 의 발현이 감소하였다. 결론: RV 14 감염시 in vitro에서 기관지 상피세포의 RANTES 발현이 증가함과 이의 조절은 NF-KB에 의존적이었다.