Laser Captured Microdissection을 이용한 생쥐 정소에서 Cannabinoid 수용체 (CB1) 발현의 분석

Abstract

Cannabinoid 수용체는 뇌에서 주로 발현되는 CB1과 면역계에서 주로 발현되는 CB2 두가지가 있으며 7개의 막관통부위를 갖는 GPCR이다. CB1의 만성적인 agonist 처리 시 adenylate cyclase활성이 과다 증가하며 마약중독에 관련된다. 생체내에 존재하는 cannabinoid인 anandamide는 CB1과 결합하여 생식기능을 조절한다. CB1 신호전달을 통한 남성생식기능의 조절을 이해하기 위해 정소에서 CB1 발현을 조사하였다. 생후 1, 2, 4, 8주령의 생쥐 정소에서 정량적 RT-PCR 및 Western blot으로 CB1 발현을 조사한 결과 1, 2주령에서는 미약하였고 4주령부터 발현이 급격히 증가하였다. Western blot 상에서 MW 60 및 53 kDa의 항원이 검출되었고 주령별 발현 양상은 mRNA와 유사하였다. 생후 3.5주령 수컷에 hCG 투여 1주 후 발현량이 증가하였다. 면역조직화학염색 결과 Leydig cell과 세정관에서 신호를 검출하였다. 성체 정소 조직절편을 Laser Captured Microdissection (LCM)법으로 간충조직과 세정관 상피를 구분 절취하여 CB1 mRNA 발현을 조사한 결과 세정관에서 다량의 mRNA가 검출되었다. CB1 발현이 정소의 발달 과정에서 급격히 증가하며 Leydig cell이 분포하는 간충조직 및 세정관 상피에서 발현될 뿐 아니라, post-meiotic germ cell이 출현하는 시기에 다량 증가하므로 생체 및 마약성 cannabinoid에 의한 steroid 생성, 정자형성 및 기능 조절에 관여하는 것으로 사료된다.