Internal ribosome entry site를 이용한 human cytochrome p450 1A1 및 cytochrome p450 reductase의 연속발현에 의한 대사활성 Chinese hamster ovary 세포주 확립
DC Field | Value | Language |
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dc.contributor.author | 박장환 | - |
dc.date.accessioned | 2021-08-04T09:18:41Z | - |
dc.date.available | 2021-08-04T09:18:41Z | - |
dc.date.created | 2021-06-30 | - |
dc.date.issued | 2001-04-26 | - |
dc.identifier.uri | https://scholarworks.bwise.kr/hanyang/handle/2021.sw.hanyang/79661 | - |
dc.description.abstract | 재조합 사람 cytochrome p450 1A1 (CYP1A1)과 cytochrome p450 환원효소 (CYPR)를 동시에 발현시키기 위하여 internal ribosome entry site (IRES)를 이용한 bicistronic construct (HCYP1A1BC4-LNCX2)를 제조하였다. Calcium phosphate 법으로 HCYP1A1BC4-LNCX2 플라스미드를 293GPG packaging 세포주에 transfection하여 retrovirus를 생산하고 Chinese hamster ovary (CHO) 세포주에 transduction하였다. Western blot으로 CYP1A1과 CYPR의 발현을 확인한 후 한계희석법으로 단세포클로닝 하여 유전자전이 세포주 CHO.1A1BL.22를 확립하였다. CHO.1A1BL.22 microsome을 제조하여 Western blot을 시행한 결과 CYP1A1과 CYPR의 분자량은 각각 58kDa, 76kDa 이었다. 2-aminoanthracene (2-AA)이 미치는 세포독성을 측정한 결과 CHO.1A1BL.22 세포주는 2-AA 250μM 이상에서 세포독성의 증가를 나타내었다. 2-AA가 CHO.1A1BL.22에 미치는 유전독성을 측정하기 위하여 시행한 single cell gel electrophoresis에서는 Komet 4™ 프로그램으로 DNA tail moment를 측정한 결과 2-AA 0.1μM까지 농도의존적으로 DNA 손상을 나타내었다. 이상의 결과로 본 연구에서 수립된 CYP1A1 및 CYPR 연속발현 CHO.1A1BL.22 세포주는 CYP1A1에 의한 대사활성능을 발현하는 것을 알 수 있으며, 이는 앞으로 in vitro 대사활성화를 위한 독성검사 모델 및 cytochrome p450 작용기전 연구에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 추정된다. | - |
dc.publisher | 기초의학협의회 | - |
dc.title | Internal ribosome entry site를 이용한 human cytochrome p450 1A1 및 cytochrome p450 reductase의 연속발현에 의한 대사활성 Chinese hamster ovary 세포주 확립 | - |
dc.type | Conference | - |
dc.contributor.affiliatedAuthor | 박장환 | - |
dc.identifier.bibliographicCitation | 제9회 기초의학학술대회 | - |
dc.relation.isPartOf | 제9회 기초의학학술대회 | - |
dc.citation.title | 제9회 기초의학학술대회 | - |
dc.citation.conferencePlace | 서울대학교 | - |
dc.type.rims | CONF | - |
dc.description.journalClass | 2 | - |
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