FRTL-5 세포에서 TSH 수용체를 통한 포스포리파제 D의 활성화

Abstract

목적: 포스포리파제 D(phospholipase D, PLD)는 세포 밖으로부터의 호르몬이나 성장인자 자극에 의해 활성화되며, 염증이나 면역 반응, 세포 내에서의 단백질 이동 과정의 조절, 세포의 성장 등에 관여하는 것으로 알려져 있다. 갑상선 세포에서의 PLD의 역할은 잘 알려져 있지 않으나 최근 TSH 자극에 의해 그 활성이 증가할 수 있다는 보고가 있었다. 따라서 본 연구자들은 FRTL-5 세포를 이용하여 TSH가 PLD의 활성화를 유도할 수 있는지를 관찰하고, TSH에 의한 PLD 자극이 그레이브스병 환자의 혈청에 의해서도 가능한지를 확인하였다. 방법: PLD 활성도는 [3H]-phosphatidylethanol (PEt)의 생성을 측정하였다. FRTL-5 세포를 [3H]-myristate로 표지한 후 TSH로 자극하고 세포를 수확하여 silica gel 60 plate에서 thin layer chromatography(TLC)로 PEt를 분리하여 방사성 활성도를 베타 카운터로 측정하였다. 전형적인 그레이브스병 환자의 혈청에서 면역 글로불린을 분리한 후 TBII를 측정하였고, FRTL-5 세포와 정상 및 돌연변이 사람 TSH 수용체를 발현한 CHO 세포를 이용하여 갑상선자극항체 역가를 측정하였다. 이 면역 글로불린을 이용하여 PLD 활성도를 측정하였다. 결과: TSH에 의해 자극되는 PLD의 활성도는 120분에 최고를 보였으며 100μU/ml의 TSH로 자극하였을 때 최고의 활성도를 나타내었다. 갑상선자극항체에 의해서도 TSH와 동일한 효과를 나타내는지를 확인하기 위하여 3명의 그레이브스 환자 혈청에서 분리한 면역 글로불린으로 FRTL-5 세포를 자극한 후 PLD 활성도를 측정하였다. FRTL-5 세포에서 적어도 정상의 10배 이상의 cAMP 생성을 자극하는 면역 글로불린임을 확인하였다. 그러나 이 면역 글로불린을 1 mg 에서 5 mg/ml 까지 농도를 변화시켜 FRTL-5 세포를 자극하였을 때 PLD 활성은 전혀 증가하지 않았다. 결론: TSH에 의한 PLD의 활성화는 갑상선자극항체에 의해서는 유도되지 않았으며, 이는 TSH에 의한 PLD 활성화의 기전은 기존의 아데닐릴 사이클라제나 포스포리파제 C 체계와는 다른 기전이 작용할 가능성을 시사한다.