Thrombospondin-1 첫 번째 type I repeat 펩티드의 신혈관형성 억제작용

Abstract

신혈관형성 (angiogenesis)은 척추동물의 발생과정 또는 질병 시에 수반되는 중요한 생물학적 현상이다. 혈관형성 억제물질의 하나로 알려진 Thrombospondin-1 (TSP-1)은 CSVTCG 아미노산 서열을 포함하는 두 번째와 세 번째type I repeat 부분이 혈관내피세포의 이동을 억제함으로써 혈관형성을 차단하는 것으로 알려져 있으나 CSVTCG 서열과 다른 서열을 갖는 첫 번째 type I repeat 부분의 역할은 잘 알려져 있지 않았다. 따라서 본 연구에서는 아미노산 서열의 차이를 나타내는 사람과 소 TSP-1의 첫 번째 type I repeat 부분 (TSR-1)이 신혈관형성 억제능력에 있어서 어떠한차이를 나타내는지 규명하였다. 이를 위해 TSR-1 펩티드 또는 PBS를 섞은 Matrigel에 bFGF를 첨가하여 생쥐복부피하에 주사함으로써 신혈관형성을 유도하였고 일주일 후에 헤모글로빈 양, 혈관의 개수, Matrigel의 색수치 등을 비교하여 신혈관형성 억제능력을 비교하였다. 또한 계란의 융모막 시험법을 통해서도 혈관형성을 억제하는지 확인하였다. 시험관내분석을 위해서는 TSR-1 펩티드를 배양 중인 HUVEC 세포에 처리하여 세포의 증식, 이동 및 맥관형성능력 등을 비교하였다. TSR-1 펩티드의 세포사멸효과는 유세포분석법으로 비교하였다. 실험 결과 소와 사람의 TSR-1 펩티드는 in vivo Matrigel assay와 CAM assay에서 신혈관형성을 억제하였으며, 소의TSR-1 펩티드가 사람의 TSR-1 또는 대조군 펩티드 (CSVTCG)에 비해 강한 억제효과를 나타내었다. 그리고 소와 사람 TSR-1 펩티드 및 CSVTCG 펩티드는 모두 HUVEC 세포의 증식은 억제하지 못했지만 세포이동 및 세포사멸을 조절함으로써 신혈관형성을 억제하였다. 이상의 실험 결과를 통해 사람과 소의 TSR-1 펩티드는 아미노산 서열은 다르지만 CSVTCG 서열이 아니더라도 유사한 펩티드로서 신혈관형성을 억제하는 능력을 나타낸다는 사실을 확인할 수 있었다.