소아 아토피피부염에서 Phospholipase D1의 SNP 발굴 및 연관성

Abstract

목 적 : Phospholipase D (PLD, phosphatidylcholine phosphodiesterase)는 여러 형태의 생리학적 진행 과정에서 세포막에 존재하는 글리세롤 인지질(glycerophospholipid)의 terminal diester 결합을 가수분해하여 phosphatidic acid (PA)와 결합되어있던 head group을 분해시키는 효소이다. PLD 유전자의 다형성을 발굴하기 위해 Genomic DNA추출, primer의 구축, 각 엑손(exon) 지역의 PCR 및 DGGE분석, PCR 산물을 이용한 염기서열 결정과 분석으로 확인하는 과정을 거치는 일련의 체계를 구축하고 유전자 다형성을 발굴 후 아토피피부염의 위험인자로 쓰여지는 임상적 지표들과의 관계를 밝혀 궁극적으로 아토피피부염 진단지표로서의 가능성을 검토하고자 하였다. 방 법 : 아토피피부염 진단기준에 합당한 만 18세 이하의 환자 118명을 대상으로 하여 임상 기록을 작성하고 보호자의 동의를 얻은 후 검사를 시행하였다. 모든 아토피피부염 환아는 SCORAD 지수를 이용하여 중증도를 분류하였다. 채취한 혈액으로부터 PUREGENE DNA Purification kit (Gentra, Minnesota, USA)를 이용해 total genomic DNA를 추출하였다. PCR을 수행한 후에 1.5% agarose gel에서 PCR 생성물을 확인했다. 증폭된 각 PCR 생성물을 DGGE 방법을 사용하여 SNP를 검출하였다. 결 과 : 대상 환아를 SCORAD 지수로 분류한 결과 경증 47명(SCORAD 지수<25), 중등증 48명(SCORAD 지수 25-50), 중증 23명(SCORAD 지수 >50)이었다. 118명의 DNA 표본 중 DGGE 분석을 통해 4명의 표본에서 다형성을 발견하였으며, PLD1의 26개의 엑손 중 23 엑손에서 3개의 PLD1 cSNP (Exon23 : G2658A, T2664A, G2684A)를 검출하였다. 발견된 각각의 cSNP 중 G2658A는 PLD1 엑손 상의 2658위치가 Guanine에서 Adenine으로 치환되었으며, T2664A는 2664번 위치가 Thymine에서 Adenine으로, G2684A는 2684번 위치가 Guanine에서 Adenine으로 치환됨을 알 수 있었다. 결 론 : 118명 아토피피부염 환아 에서 3개의 PLD1 gene cSNP (G2658A, T2664A, G2684A)을 최초로 발견하였다. 그 중 G2658A 다형성은 IgE의 수치와 관련이 있을 것이라 판단되나 PLD1 cSNP이 직접적으로 아토피피부염의 발생에 기여하지는 않을 것으로 생각된다.