Effect of Gonadotriophic Hormones on AQP Genes Expression and Localization in Mouse Ovary

Abstract

Background & Objectives: AQP은 passive water transporter로써 현재까지 11개가 밝혀져 있으며 그 중 AQP 7,8,9 의 경우 aquaglyceroporin 이라 불리며 이겨우 water 뿐만 아니라 glycerol 이나 urea 같은 small molecule 의 투과가 가능하다. Folliculogenesis 시기에 일어나는 급속한 난포액의 축적에 AQPs 유전자를 통해 이루어 질 것으로 추측되고 있다. 본실험에서는 folliculogenesis 동안의 AQP 7,8,9의 발현량과 부위를 조사하였다. Methods: 3주령의 미성숙 생쥐를 이용하였다. PMSG 주사후 8, 24,48 시간, 연속적으로 hCG injection 후 8, 16,24 시간후 도살하여 난소를 획득하였다. RT-PCR을 이용해 일차적으로 전체 ovary의 mRNA 발현량을 확인하고, 이후 laser captured microdissection(LCM) 을 이용하여 theca layer와 granulose cell(GC) 부위를 나누어 획득하여 조직별 발현을 확인 하였다. AQP 7,8,9 specific Ab 를 이용해 immunohistochemistry를 수행하여 발달중인 난포내 AQP7,8,9 protein localization을 보았다. Result: RT-PCR 결과 AQP 7,8,9 모두 PMSG, hCG injection 후 증가하였다. AQP7 과 9 의 발현양은 injection 초기에 감소한 후 ovulation 시기에 이르러서 그 양이 증가함이 확인되었다. AQP8의 경우 이와 다르게 초기 증가 후 다시 감소하였다. LCM sample RT-PCR 결과 AQP 7,8,9 모두 대부분 theca layer 에서 GC 부분보다 많은 발현을 보였으며 일부 luteal cell 에서는 이전의 GC 들에 비해 높은 AQP 발현을 보였다. Immunohistochemistry 결과 mRNA 발현량과 유사하게 난포발달 전 과정에서 theca cell layer 에서 발현이 강하게 검출되었으며, luteal cell 에서의 발현은 GC 에서의 발현보다 강하였다. Conclusion: 난포형성과정에서 AQP 7,8,9의 mRNA 및 단백질의 발현에 근거할 때 이들은 난포발달과 배란과정 동안에 난포액의 축적에 관여할 뿐만 아니라, 이후의 corpus luteum 형성에도 관여하는 것으로 보인다.