사람 CYP2E1 유전자다형 발현 HepG2 세포주 microsome을 이용한 나프탈렌 대사 측정

Abstract

Cytochrome p450 2E1 (CYP2E1)의 5`-flanking 부위중 RsaI 유전자다형에 따라 다환방향족탄화수소 등 독성물질에 대한 감수성에 영향을 미치는 것으로 알려지고 있으며, 이의 측정을 위해 뇨 중 2-나프톨 (naphthol)이 측정이 용이한 적절한 노출지표임이 보고되었다. 하지만 in vitro 상에서 CYP2E1 RsaI 유전자다형에 따른 나프탈렌 대사량 변화를 측정한 직접적인 보고는 없었다. 이에 본 연구에서는 HepG2 세포주에 CYP2E1 RsaI 유전자다형을 표현하는 벡터를 유전자전이시켜 나프탈렌 대사능을 측정하기 위한 세포주를 확립하고자 하였다. CYP2E1 유전자의 5`-flanking 부위중 PstI site -, RsaI site +인 유전자형을 2E1 c1 allele으로, PstI site +, RsaI site -인 유전자형을 2E1 c2 allele로 구분하여 CAT(chlroramphenicol acetyltransferase) 발현에 미치는 영향을 측정하였으며, Western blot으로 2E1 단백의 발현에 미치는 영향을 측정하였다. 유전자전이는 lipofectamine 및 retroviral system을 이용하였다. 2-니프톨 측정은 세포주에 나프탈렌을 2시간 투여한 후 상청액을 HPLC로 측정하였다. CAT assay와 Western blot상에서는 c1 allele가 c2 allele에 비해 높은 활성을 나타내었으나 나프탈렌 투여 후 상청액을 이용한 2-나프톨 측정은 유의한 결과를 얻지 못하였다.