상황버섯(Phellinus linteus) 균사체 액체 발효물로부터 면역 활성 다당 분획

Abstract

포스트바이오틱스 소재 활용 가능성을 평가하고자 Phellinus linteus 균사체에 의해 발효된 액체 배양액에서 5종의 시료(액체 발효물의 열수추출물: PL-HW, 액체 발효물 열수추출의 주정침전: PL-CP, 균사체 열수추출물: PM-HW, 균사체 열수추출의 주정침전: PM-CP 및 배양 상등액 주정침전: EPS)를 분획하였다. RAW 264.7 세포를 이용한 선천면역 세포 활성을 평가한 결과, EPS가 가장 우수한 TNF-α, MCP- 1, IL-6 및 NO의 생성능을 유도하는 것으로 나타났다. 마우스 비장으로부터 분리된 primary splenocyte를 이용한 적응면역 세포 활성 평가에서, PL-HW, PM-HW 및 EPS가 우수한 비장세포 증식 활성을 유도하는 것으로 나타났다. 특히, EPS는 primary splenocyte에서 Th1 관련 사이토카인인 TNF-α와 IFN-Υ의 생산을 유의적으로 증진시킴으로써 세포-매개 적응면역 반응 활성화에 효과적일 수 있을 것으로 사료되었다. 일반성분 분석결과, 활성 시료인 EPS는 중성당(90.2%), 산성당(6.1%), 단백질(1.2%) 및 폴리페놀(2.5%)의 조성을 가지는 것으로 확인되었으며, 구성당 분포는 중성당으로서 높은 비율의 glucose(94.9%)와 소량의 mannose(3.8%), galactose(0.9%) 및 glucuronic acid(0.4 %)를 함유하고 있는 것으로 나타났다. 결론적으로 배양 상등액으로부터 분리된 EPS는 glucan의 존재를 확인할 수 있었으며, 선천면역 및 적응면역세포의 자극을 촉진할 수 있는 것으로 확인되었다.

A liquid culture was fermented using Phellinus linteus mycelium, and 5 fractions were isolated to evaluate the possibility of using them as postbiotic ingredients. The fractions isolated were: Hot-water extract (PL-HW) from whole liquid culture, crude polysaccharide (PL-CP) from PL-HW by ethanol (EtOH) precipitation, hot-water extract (PM-HW) from isolated mycelia, crude polysaccharide (PM-CP) from PM-HW, and exopolysaccharide (EPS) from culture supernatant by EtOH precipitation. Innate immunostimulating activity using the RAW 264.7 cell line showed that EPS induced the most effective production of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), interleukin-6 (IL-6), and nitric oxide. In addition, adaptive immunostimulating activity using splenocytes isolated from C3H/HeN mice revealed that PL-HW, PM-HW, and EPS induced prominent splenocyte proliferation. Specifically, EPS stimulated the production of Th1-activated cytokines such as TNF-α and interferon-gamma (IFN-γ) in splenocytes, suggesting its effectiveness in cell-mediated adaptive immune activation. General chemical analysis showed that the immunostimulatory EPS was composed of neutral sugar (90.2%), uronic acid (6.1%), protein (1.2%), and polyphenols (2.5%). Component sugar analysis indicated that EPS was composed of a high proportion of glucose (94.9%), and small amounts of mannose (3.8%), galactose (0.9%), and glucuronic acid (0.4%). In conclusion, it was confirmed that glucan-type exopolysaccharide fractionated from the culture supernatant of the P. linteus mycelium can promote both innate and adaptive immune cell stimulation