토끼 뒷다리 만성허혈모델에서 phVEGF165 유전자 치료: 동맥내 주입과 근육내 주사의 비교

Abstract

목적: 혈관신생의 기능이 있는 phVEGF165를 합성하고, 토끼 뒷다리의 만성허혈모델에서 동맥내 주입과 근육내 주사를 통하여 혈관신생의 효과를 비교하고자 하였다. 대상과 방법: 토끼의 좌측 뒷다리에 만성허혈모델을 만들고, 대조군 6마리와 동맥내 주입군 7마리, 근육내 주사군 5마리로 나누었다. HL60 세포주로부터 혈관내피세포성장인자(VEGF)를 발현하는 phVEGF165를 제조하여, CHO 세포주에 유전자 전달감염시켜 western blot 분석을 하고, CPAE 세포주에 대한 증식효과를 분석하였다. 만성허혈모델을 만든 2주째에 phVEGF165 500 ㎍/2.5 ml를 동맥내 주입군은 좌측 총장골동맥으로, 근육내 주사군은 대퇴부 근육내 주사하였다. 유전자 주입 전과 주입 후 4주째에 혈관조영영상을 얻었다. 영상분석은 대퇴골의 수직이등분선과 만나는 혈관의 개수의 비를 구하였다. 유전자 주입 후 0, 4, 7, 14, 21일에 혈청 VEGF165 양을 측정하였다. 통계분석은 Wilcoxon signed rank test로 하였다. 결과: 유전자가 전달감염된 CHO 세포주의 배양배지에서 VEGF165 단백질 발현이 확인되었다. CPAE 세포주의 증식실험에서 흡광도가 대조군은 0.73±0.043, phVEGF165은 1.09±0.015를 보여 증식효과가 있었다. 토끼 뒷다리 만성허혈모델에서 유전자 치료 전후에 혈관 수의 변화가 대조군은 1.32±0.13과 1.30±0.07, 동맥내 주입군은 1.42±0.15와 1.59±0.09, 근육내 주사군은 1.59±0.27과 1.14±0.12를 보였으나, p>0.05로서 유전자 치료전후에 두군 모두 통계적인 유의성은 없었다. 혈청내 VEGF는 동맥내 주입군에서는 유전자 주입 전 39.96±1.08 pg/ml, 4일째 44.99±2.13 pg/ml, 1 주 째 48.18±1.49 pg/ml, 2주째 45.70±3.77 pg/ml, 3주째 46.54±5.47 pg/ml로 증가를 보였다. 대조군과 근육내 주사군에서는 증가가 관찰되지 않았다. 결론: 제작된 phVEGF165가 실험실내에서 혈관내피세포의 증식에 효과가 있었다. 토끼 뒷다리 만성허혈모델에서 phVEGF165 유전자 치료는 동맥내 주입과 근육내 주사 간에 혈관조영술과 혈청 VEGF 측정의 결과에서 차이가 없었다.