FRTL-5 세포에서 TSH 수용체를 통한 세포내 신호전달체계에서 cAMP계와 Phosphoinositide계의 상호작용

Abstract

연구배경: 갑상선자극호르몬(TSH)는 갑상선세포 표면의 수용체와 결합하면 G 단백을 통해 아데닐릴 사이클라제와 포스포리파제 C를 모두를 활성화한다. 본 연구에서는 이러한 두 시스템이 동시에 자극됨에 따라 서로간에 상호작용이 있는지를 알아보았다.방법: FRTL-5 갑상선 세포를 6H 배양액에 키운 후 자극 전 5H 배양액으로 갈아주었다. 이후 mCi/L myo-(2-N-3H) inositol로 표지한 후 갑상선호르몬으로 자극하였다. 갑상선호르몬 자극 전에 100μM Rp-cAMP, 100μM forskolin, 100 nM PMA, 50 nM staurosprine을 전처치하여 단백질키나제 A와 단백질키나제 C를 각각 자극 및 억제시킨 후 TSH에 의한 inositol phosphates 생성을 측정하였다.결과: FRTL-5 세포를 100μU/mL의 TSH로 자극하였을 때 IP 생성은 1.65배 증가하였다. 두가지 신호전달체계간의 상호작용을 관찰하기 위하여 단백질키나제 A의 억제제인 Rp-cAMP와 자극제인 forskolin을 전처치한 후 TSH에 의한 IP 생성을 측정하였다. 단백질키나제 A를 억제할 수 있는 농도의 Rp-cAMP를 전처치한 경우 TSH에 의한 IP생성은 증가하였고, 이는 Rp-cAMP 농도에 비례하였다. Forskolin은 반대로 TSH에 의한 IP 생성을 억제하였다. 한편 단백질키나제 C의 자극제와 억제제인 PMA와 staurosporine은 TSH에 의한 IP 생성에 별 영향을 주지 못하였다.